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    I C S6 5 .0 2 0 .3 0 B4 4 a 雪 中华人民共和国国家标准 G B /T 14 9 2 6 .4 7 2 0 0 8 代替6 B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 1 实验动物志贺茵检测方法 L a b o r a t o r ya n i m a l - - M e t h o df o re x a m i n a t i o no fS h i g e l l as p p . 2 0 0 8 - 1 2 - 0 3 发布 2 0 0 9 0 3 01 实施 宰瞀鹊鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1 9 刖昌 G B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 8 G B /T1 4 9 2 6 实验动物共5 4 个部分,为不同微生物和病毒检测技术方法。 本部分自实施之E t 起代替G B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 1 实验动物志贺菌检测方法。 本部分与G B /T1 4 9 2 6 .4 72 0 0 1 相比主要技术差异如下 a 对G B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 1 实验动物志贺菌检测方法部分内容进行了修订和增加; b 在原标准“5 培养基及试剂”中增加了“5 .2G N 增菌液”,将原标准中“5 .3S .S 琼脂”修改为 c d e “5 .4X L D 琼脂”; 在原标准“6 检测程序”中增加了“G N 增菌液 3 6 士1 ℃培养6h ~8h ”这一程序; 在原标准“6 检测程序”中将“S .S 琼脂”修改为“X L D 琼脂”; 原标准“7 .2 分离培养将已接种的麦康凯琼脂和s .s 琼脂平皿置 3 6 ±1 ℃培养1 8 ~2 4 h ?!毙?改为“7 .2 增菌分离培养将已接种的G N 增菌液置 3 6 ±1 ℃培养6h ~8h ,转种麦康凯琼脂 和X L D 琼脂平皿,置 3 6 士1 ℃培养1 8h ~2 4h ”; 原标准“7 .3 .1 菌落特征志贺菌在麦康凯和S .S 琼脂平皿上形成无色透明、圆形、扁平或微凸 起,光滑湿润,边缘整齐,直径约2m m 的菌落。宋内氏志贺菌菌落一般较大,半透明,有时可 出现扁平,边缘不整齐的粗糙型菌落?!毙薷奈? .3 .1 菌落特征志贺菌在麦康凯琼脂平皿上 形成无色、凸起、直径2m m ~3m m 的菌落。在X L D 琼脂平皿形成红色、光滑、直径1m m ~ 2m m 的菌落。痢疾志贺氏菌1 型在一k 述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落 要小”; g 原标准“7 .3 .5 表1 志贺菌生化反应”中“七叶苷脱羧酶”修改成“七叶苷”。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草。 本部分主要起草人黄韧。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 G B /T1 4 9 2 6 .4 72 0 0 l 。 1 范围 实验动物志贺菌检测方法 G B /T14 9 2 6 .4 7 2 0 0 8 G B /T1 4 9 2 6 的本部分规定了实验动物志贺菌的检测方法。 本部分适用于猴志贺菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过G B /T1 4 9 2 6 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单 不包括勘误的内容 或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分。 G B /T1 4 9 2 6 .4 2 实验动物细菌学检测标本采集 G B /T1 4 9 2 6 .4 3 实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂 3 原理 志贺菌是革兰氏阴性短杆菌,在三糖铁或双糖铁等培养基上具有特定的生长和生化特征。因此,可 通过选择性培养基培养、生化和血清试验鉴定志贺菌。 4 主要设备和材料 普通恒温培养箱。 5 培养基及试剂 5 .1 C a r y - B l a i r 运送培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .2G N 增菌液成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .3 麦康凯琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .4X L D 琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .5 克氏双糖铁琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .6 三糖铁琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .7 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .8 氨基酸脱羧酶试验培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .9 尿素琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .1 0 半固体琼脂成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .1 1 糖发酵培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .1 2 氰化钾生长培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .1 3 葡萄糖铵培养基成分及配制方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 3 。 5 .1 4 志贺菌多价诊断血清。 G B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 8 6 检测程序 图1 检测程序 7 操作步骤 7 .1 采样 采取粪便或肛拭子标本,采样方法见G B /T1 4 9 2 6 .4 2 。 7 .2 增菌分离培养 将已接种的G N 增菌液置 3 6 土1 ℃培养6h - - 8h ,转种麦康凯琼脂和X L D 琼脂平皿,置 3 6 ± 1 ℃培养1 8h ~2 4h 。 7 .3 鉴定 7 .3 .1 菌落特征 志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色、凸起、直径2m m ~3m m 的菌落。在X L D 琼脂平皿形成红 色、光滑、直径1r a m - - 2m m 的菌落。痢疾志贺氏菌1 型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺 菌属菌落要小。 7 .3 .2 菌体特征 革兰氏阴性小杆菌,无鞭毛,无芽孢。 7 .3 .3 培养特性 本菌接种克氏双糖铁或三糖铁琼脂, 3 6 士1 ℃培养1 8h ~2 4h 后,斜面不产酸,底层产酸不产气, 硫化氢阴性。 2 7 .3 .4 动力半固体试验 阴性。 7 .3 .5 本菌生化特征 见表1 。 表1 志贺菌生化反应 G B /T1 4 9 2 6 .4 7 2 0 0 8 生化检测项目判定结果生化检测项目 判定结果 葡萄糖铵赖氨酸脱羧酶 七叶苷尿素 鸟氨酸脱羧酶‘西蒙氏柠檬酸盐 K C N 生长水杨苷 注“ ”表示阳性,“一”表示阴性。 8 C 群1 3 型和D 群为阳性。 7 .3 .6 血清玻片凝集试验阳性。 8 结果报告 凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告,不符合者作出阴性报告。生化反应不符合的菌株,即使 能与某种志贺菌分型血清发生凝集,仍不得判定为志贺菌属的培养物。
    编号:20190623225622823    类型:共享资源    大?。?span class="font-tahoma">80.42KB    格式:RAR    上传时间:2019-06-23
      
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