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    I C S6 5 .0 2 0 .3 0 B4 4 缮园 中华人民共和国国家标准 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 代替G B /T14 9 2 7 .1 2 0 0 1 实验动物近交系小鼠、 大鼠生化标记检测法 L a b o r a t o r yA n i m a l s - - M e t h o d sf o rb i o c h e m i c a lm a r k e r so fi n b r e dm i c ea n dr a t s 2 0 0 8 1 2 - 1 0 发布2 0 0 9 - 0 3 - 01 实施 宰瞀鹛零瓣訾雠瞥霎发布中国国家标准化管理委员会仅1 9 前言 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 G B /T1 4 9 2 7 共分2 个部分 ~第1 部分为实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测法; 一一第2 部分为实验动物近交系小鼠、大鼠免疫标记检测法。 本部分为G B /T1 4 9 2 7 的第1 部分。 本部分自实施之I 1 起代替G B /T14 9 2 7 .1 2 0 0 1 实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测 方法。 本部分与G B /T1 4 9 2 7 .12 0 0 1 相比主要技术差异如下 a 在近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的电泳结果模式图基础上,增加电泳图谱; b 调整了近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的部分生化位点,小鼠增加了肽酶3 p e p 3 位 点,大鼠增补血清碱性磷酸酶 A l p 和血红蛋白 H b b 两个生化位点; c 对部分溶液配方进行调整。 本部分的附录A 、附录B 、附录C 和附录D 为资料性附录。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。 本部分起草单位全国实验动物标准化技术委员会。 本部分主要起草人邢瑞昌、刘双环、岳秉飞、鲍世民、张连峰。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 ~G B /T1 4 9 2 7 .119 9 4 ,G B /T1 4 9 2 7 .12 0 0 1 。 实验动物近交系小鼠、 大鼠生化标记检测法 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 1 范围 G B /T1 4 9 2 7 的本部分规定了对近交系小鼠、大鼠生化标记进行检测的醋酸纤维膜 板、硬膜 的电 泳方法及判断标准。 本部分适用于近交系小鼠和大鼠任何品系。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于6 B /Tl4 9 2 7 的本部分。 2 .1 生化标记b i o c h e m i c a lm a r k e r 表明遗传特征并采用生化方法识别的记号。在小、大鼠中多为一些同工酶和异构蛋白。 2 .2 生化遗传概貌b i o c h e m i c a lg e n e t i cp r o f i l e 各种近交系多个生化遗传标记表型资料的汇总,从一定程度上反应了各种品系的遗传特征。 2 .3 纯合性h o m o z y g o s i t y 同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态。近交系动物通过连续的近亲交配绝大部分的位点 都具有纯合性。一个品系内任何个体问进行交配产生的后代也具有纯合性。 2 .4 同基因性i s o g e n i c i t y 一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的。因此在同一品系内任何个体问进行皮肤和肿瘤移植 不被当作异己而受到排斥。如列近交系动物的基因进行检测,一个品系内不同个体的基因型完全一致。 2 .5 个体性i n d i v i d u a l i t y 就整个近交系动物而言,每个品系在遗传卜都是独特的,表现在相“{ 广泛的特性上,如生化遗传概 貌等。大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别。 3 方法原理 在小鼠和大鼠体内存在着一峰同工酶和同种异构蛋白。町依据它们在特定电场内携带的电荷不同 采用电泳的方法将它们区分,并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基幽型,建立各种近交系的遗传 概貌,定期对它们进行质量监测。 4 设备和材料 4 .1 常压电泳仪 0 ~6 0 0V 。 4 .2 醋酸纤维素膜 板、硬膜 电泳槽。 4 .3 电泳点样装置。 4 .4 醋酸纤维素膜 7C 1 1 1 9C I l l 。 1 G B /1 ’1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 4 .5 醋酸纤维素板 6C F I I 8c m 。 4 .6 醋酸纤维素硬膜 7C I I ] 9c m 。 4 .74 ℃冰箱。 4 .8 2 0 ℃或4 0 ℃冰箱。 4 .9 4 ℃低温高速离心机。 4 .1 0 振荡仅。 4 .1 1 组织匀浆机 2 m I ?;? m I , 。 4 .1 2 抗凝毛细管。 4 .1 3 抗凝毛细管塞子。 4 .1 4 毛细管离心机。 4 .1 5 吸耳球。 4 .1 6 小砂轮。 4 .1 7 解剖板。 4 .1 8 手术剪,手术镊。 4 .1 9 竹镊子。 4 .2 0 微波炉。 4 .2 1 3 7 ℃温箱。 4 .2 2 玻璃器皿。 4 .2 3 6C n l 8C m 或7c n l 9C n l 玻璃板。 4 .2 4 普通滤纸。 4 .2 5 分析天平。 4 .2 6 p H 计。 4 .2 7 紫外监测仪。 4 .2 8 实验室常规用品。 4 .2 9 化学试剂见表1 。 表1 化学试剂 中文名称 英文名称 或简写分子式规格 三羟甲基氮基甲烷 T r I sC 。H l l N O _ f分析纯或化学纯 乙 胺四乙酸 E D ,I AC 】n H l5 N 2 8分析纯或化学纯 硼酸 b o r i ca c i dH3 8 0 3分析纯或化学纯 廿氨酸g l y c i n e C H ,N o z分析纯或化学纯 盐酸h y d r o c h t o r i ca c i d f I C l分析纯或化学纯 双氧水 h y d r o g e np e r o x i d e3 0 %s o l u t i o n H ¨ 2分析纯或化学纯 柠檬酸 c l ”a t ea c i dm n o h u d r a t e 6 H 8 7 ·H2 分析纯或化学纯 磷酸氧二钠 s o d i u mp h o s p h a t ed i b a s i cN a 2 H P 0 4 ·12 H2 分析纯或化学纯 磷酸二氢钾p o t a s s i u md i h y d r o g e np h o s p h a t e K H2 P 4 分析纯或化学纯 氢氧化钠 s o d i u mh y d r o x i d e N a O H 分析纯或化学纯 无水醋酸钠 o d i u ma c e t a { ea n h y d r o u sN a C H3 0 分析纯或化学纯 琼脂粉分析纯或化学纯 醋酸镁M g C H 2 J 2 2分析纯或化学纯 表1 续 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 中文名称英文名称 或简写分子式规格 氯化锰 m a n g a n e s ec h l o r i d e M n C l z分析纯 丽春红一SC 2 2 H 1 。N 4 N a 4 0 ?S分析纯 三氯乙酸t r i c h l o r o a c e l i ca c i dC C 】,C O O H分析纯或化学纯 磺基水杨酸 s a I f o s a l i c v l i ca c l dC ,H6 0 S ·2 H2 0 分析纯或化学纯 巴比妥 b a r b i t a lC R H 】2 N 2 H 分析纯或化学纯 巴比妥钠 s o d i u mb a r b i t a l C R I t 】2 N 2N a0 3分析纯或化学纯 氯化镁m a g n e s i u mc h l o r i d eM g C I ,·6 H2 0分析纯或化学纯 乙二胺四乙酸二钠 N a ,E D T A C 1 。H 1d N2 N a 2 0分析纯或化学纯 三氯化铁 f e r r i cc h l o r i d ea n h y d r o u s F e C l 3分析纯或化学纯 铁氰化钾f e r r i c y a n n t u mk a l i u mK .、[ F e C N 。分析纯或化学纯 氢氧化铵 a m m o n i u mh y d r o x i d eN H 。 H 分析纯或化学纯 醋酸 C H 、C O O H 分析纯或化学纯 丙酮C H IC O C H2 分析纯或化学纯 葡萄糖一1 一磷酸g l u c o s e1p h o s p h a t e C H 1 1 0 9 P N a , 胱胺盐酸盐c y s t a m i n ed l h v d r o c h l o r l d eC 4 H 】4 C 1 2 N 2S 2 二硫苏糖醇 1 ,4d l t h l o h r e l t o l D T T C ;H ?OS 4 甲基散形乙酸盐4 m e t h y l u m b e l l i f e r ya c e t a t eC 】【】I t s O _ 日乙酸萘酯p n a p h t h y la c e t t e C 12H 1 。 2 口一磷酸萘酯钠盐p n a p h t h y [ a c i dp h o s p h a t e C ㈤H R 4 P N a 口一磷酸萘酚二钠盐I - n a p h t h y lp h o s p h a t ed i s o d i u ms a l tC 1 0 H , 4 P N a 2 n 果糖6 磷酸 1 f r u c t o s e - 6p h o s p h a t ed i s o d i u ms a l t C 6 H 【l g N a 2 P 溴化甲基噻唑蓝t h i a z o l y lb l u et e t r a z o ] i u mb r o m i d e M T T C l8H l6 B r N 8 S 辅酶1 I p n i e o t i n a m i d ea d e n i n ed i n u c l e o t i d e T P N C 2 lH27 N 7 】7 P 3 甲硫吩嗪酸酯 N m e t h y lp h e n a z i n i u mm e t h y ls u l f a t e P M S C lH H l 【N 2 C H 3 S 0 4 异柠檬酸三钠盐 D I 。i s o e i t r i ca c i dtr i s o d i u ms a l t C 6 H 。 7 N 砒 葡萄糖l ,6 磷酸g l u c o s e1 .6d i p h o s p h a l eC 。H ? 12P 葡萄糖6 磷酸 I _ g l u c o s e 6p h o s p h a t e C 6 H l3 9 P N a 2 葡萄糖6 磷酸脱氧酶g l u c o s e6p h o s p h a t ed e h y dr 。g e n a s e 苹果酸 D I 。m a l l ca c i d H 2 C C H 2 O H C 0 2H 坚固蓝R R 盐 f a s tb l u eR Rs a h C l 。H l4N ≈0 3 1 /2 Z n C l 4 I 。白氨酰替I 。丙氨酸I 。l e u e v l1 - a l a n i n eC 9 H 】8 N 2 3 过氧化物酶 邻二甲氧基联苯胺盐酸盐 。一d i a n i s i d i n ed l h v d r o c h l r l d e [ c 。H 。 O C H 。 N H 。] p 磷酸萘酚口n a p h t h y la c i dp h o s p h a t eC 10 1 1 B O { PN a 。 硫酸镁m a g n e s i u ms u l f a t eM g S O 一·7 H ,O分析纯或化学纯 3 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 5 生化标记检测方法总则 5 .1 电泳样品的制备 5 .1 .1 血浆 以抗凝毛细管行眼眶采血术,5 0 0 g ,离心5m i n ,分离血浆和血球,吸出血浆备用。 5 .1 .2 溶血素 在去除血浆的富含红血球的试管内加入蒸馏水,红血球与蒸馏水的比例一般为1 4 V /V ,振荡 1m i n ,成为红色透明液体,即为溶血素。 5 .1 .3 组织匀浆上清液 采用安死术处死动物,剖腹,小鼠取肾脏1 只,肝脏1 叶;大鼠取肾脏1 只,小肠6c m ~8C I /I ·,睾丸 1 只,并开胸取肺脏1 叶。分别加入适量预冷蒸馏水,蒸馏水与组织的比例一般为2 1 V /m 。分别用 组织匀浆器匀浆。匀浆液置4 ℃低温高速离心机中,20 0 0 g ,3 0m i n 。以吸管吸取上清液存X d , i K 管 中备用。 5 .1 .4 样品保存 上述制备样品均宜新鲜使用,在4 ℃普通冰箱中只能保存一天,在一2 0 ℃或一4 0 ℃低温冰箱中保 存不超过一个月。 5 .2 电泳步骤 5 .2 .1 浸膜 将醋酸纤维素膜 板、硬膜 轻轻浸入相应的电泳缓冲液 参见附录A 中,浸入时应避免膜 板、硬 膜 上出现气泡。 5 .2 .2 点样 将浸透的膜 板、硬膜 ,取出以滤纸吸干,纤维素膜 板、硬膜 面朝上,平置在点样板上,以点样器取 预置在样品槽内的编号样品,在膜 板、硬膜 上点样。一次点样量为0 .3p I 。,为增加膜 板、硬膜 上的 样品量,可重复点样,最适点样量不宜超过0 .9 /z I , 三次 。 5 .2 .3 电泳 以记号笔在膜 板、硬膜 上标明原点,泳动方向,迅速将膜 板、硬膜 搭在事先放人缓冲液的电泳槽 纸桥上,盖上电泳槽,接通电源,电泳条件见相关条款。 5 .3 染色 5 .3 .1 蛋白染色法 电泳结束后取出膜 板、硬膜 置人0 .2 %丽春红染液中,5r a i n 后以竹镊子取出换以5 %~7 %醋酸 脱色直至电泳区带清晰可见。 5 .3 .2 酶显色板法 适用于醋酸纤维素膜。 5 .3 .2 .1将酶显色液 参见附录B 新鲜混和。加入2 %热琼脂3m I ?!?m I 。,迅速混匀,均匀倒置在 7C 1 1 2 9c m 的玻璃板上,制成酶显色板。 5 .3 .2 .2 电泳结束后取出膜将点样面贴在酶显色板上,注意将膜与酶显色板间的气泡排尽,但不可移 动膜的位置。 5 .3 .2 .3 将带膜显色板移至3 7 ℃温箱保温,直至酶区带清晰显现。 5 .3 .2 .4 取下已显色的膜浸入5 %~7 %醋酸中终止反应。 5 .3 .3 琼脂覆盖法 适用于醋酸纤维素板 硬膜 。 53 3 1 电泳结束后取出醋酸纤维素板 硬模 。 5 332 新鲜混和酶显色液.迅建与2m I ~3m 1 .2 蹦热琼脂混匀,均匀倒放在水平放置的醋酸纤维素 板 硬模 上。 5 3 33 待琼脂冷却固定后.将醋酸纤维索板 硬模 移人3 7 ℃温箱- 茛至酶区带清晰疑现。 5 3 34 将醋酸纤维素板 硬模 放 5 %~7 %醋酸中终止反应。 6 小鼠生化标记检测细则 61 碱性磷酸酶l a l k a l i n ep h o s p h a t a s cI ,A k p l C h rl 6I 1 样品肾匀浆,06 ,t I .。 6 { 2 缓冲液r r i s C i l r a t ep H83 参虬附录A 的第A9 章。 6 { 3 电泳支持物醋酸纤维硬膜 板 。 6 { 4 电泳条件u 一2 0 0V .f _ 4 0r a i n .移动方向由负极至正扳。 6 } 5 染色方法琼脂覆盖法。 6 { 6 染色液参见附录B 的第B1 1 尊。 6j7 标准对照 A k p ] a C 5 7 8 1 ./6 J快带 A k p l bC B A /N慢带 618 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录C 作比较 619 A k p l电泳结果及模式图,见图1 。 l 唰{ - _ - _ - _ ·- - - ABBAABABAB P h e n m y p c A BBAABABAB nh b b b ∞∞㈣b b ∞b b G ∞o U m”b b b ?? №∞№ 图1A k p I 电津结果殛模式图谱 62 碳酸酐酶2 c a r b o n i ca n h y d r a s e2 .C a r 2 C h r3 6 21 样品溶血索.03 ,t 1 。。 622 缓冲液N a C H ?OE 1 ‘F Ap H5d 参虬附录A 的第A1 章。 623 电泳支持物醋酸纤维索硬膜。 6 24 电泳条件U 2 0 0V .f 4 0m i n .移动方向由正极堑负橄。 6 25 染色方法蛋白染色法。 6 26 染色液参见附录B 的第B6 章。 6 27 标准对照 a C 5 7 B I 。/6 J b B A L B /c J 慢带 快带 628 判断方法参j } iJ .述对照动物读出带型后与附录c 作比较 629 T a r 2 电泳鲇粜及模式图.”网2 。 G B /11 4 9 2 71 2 0 0 8 l ?一~ m 。f - 一- 一一一- 一- 二】二】二】二】二1 二】二】[ 】[ r H1 3I } BAA BBA AA p h c n O 口” BBBBAA B1 1AAA bbbbb bbb∞nh b ∞∞Ⅱ㈣w wb bb hb hb ba aa bb b ?aa a 圈2C a r 2 电泳结果及模式图谱 63 肾过氧化氢酶一2 k i d n e yc a t e l a s e ,C e 2 C b r7 6 31 样品肾匀浆以蒸馏水1 3 稀释,03p L 。 6 32 缓冲液Tr i sC i t r a l e p H76 参见附录A 的第A3 章. 6 99 电泳支持物醋酸纤维索膜。 6 34 电沐条件U 一2 0 0V .t 2 5m i n .移动方向?负极生Ⅱ。饭。 635 染色方法酶显色板法。 6 96 染色液参见附录B 的第B8 章。 6 37 标准对照 C e 2a B A I ,B /c d快带 C c 2bC B A /N 慢带 6 38 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附求C 作比较。 6 39C e 2 电泳结果及模式图,见圈3 。 AAAAABAAAAP h e n o t v ∞ AAAAAHA A AA ??a ab b ∞?a a G ㈨I y o c ?aa a ∞a ab b ??a 图9C e 2 电泳结果及模式图谱 64 酯酶1 e s t e Ⅷ牡I ,E sJ C h r8 641 样鼬血清,03 “L 。 642 缓冲液p h o s p h a t eb u f f e rp H70 参见附录A 的第A2 章。 6 49 电泳支持物酣酸纤维膜。 644 电泳条件U 14 0V ,t 一3 0m i n .移动方向由m 极至正极。 645 染色方往酶显色板法。 6 46 染色液参见附录B 的第B 1 章。 647 标准对照 E HJ a C 5 7 B I /6 J №带 E s Jb C B A /N慢带 6 648 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录c 作比较 6 49 E s l 电泳结果及模式图,见图4 。 ] “{ ·‘二二一 一_ I AABA BBBB P h e n o q p e AAAABA BBBB ∞∞∞∞№ab№№bbO e n o q p e∞∞∞∞∞a bb bb b № 图4E s I 电泳结果殛模式图谱 65 酯酶3 e s t e r a s e _ 3 ,E s 3 C h r1 1 651 样品肾匀浆。 652 缓冲液T r i sG l y c i n ep H89 参见附录A 的第A7 章。 653 电泳支持物醋酸纤维硬膜。 654 电泳条件U 一2 8 0V ,t 2 8m i n ,移动方向由负极至正极。 655 染色方法琼脂覆盖法。 656 染色液参见附录B 的第Bl 章。 657 标准对照 E s 3a B A l ,B /c J慢带 E s 3bT w快带 E s 3c C B A /N最慢带 6 58 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录c 作比较。 65 9E s 3 电泳结果及模式图,见图5 。 麟 一●●- - - - _ 脚{ _ - _ - - - ’III IIII BBCA CAACA C p h e n o t y p 8 BBcA CAACA C b bb b ?∞∞∞a c m l y p 2b b №a c ¨ⅡwK 图5E S 3 电泳结果殛模式图谱 66 酯酶1 0 e N t e r a s e1 0 ,E s 】0 c h r1 4 66 1 样品肾、肝匀浆。 6 62 缓冲液T r i sG l y c i n ep H89 参见附录A 的第A7 章。 6 63 电泳支持物醋酸纤维素板 硬膜 。 664 电泳条件u 2 8 0V ,忙2 8m i n ,移动方向由负极至正极。 6 65 染色方法琼脂覆盖法。 666 染色液参见附录B 的第B2 章。 6 67 标准对照 E s j 0aB A L B /d慢带 E s l 0hC B A /N快带 E s j 0cT W最慢带 668 判断方法参照L 述对照动物读出带型后与附录C 作比较 6 69 E s l O 电津结果及模式躅,见圈6 。 i i ■ ●习 - - - ●●_ _---I- - ●_ BBABAA p h e n o l y p eE s l O BB ABAA №M∞№∞aa O e n o t y p e l s l Ob h ㈣㈨∞ CCACAAp h e n o l y p en JCC ACAA ?∞?a a h 0 4 口E s 3 ?∞?∞ 图6E s l O 电泳结果殛模式图谱 67 葡萄糖6 磷酸脱氢酶- 1 g l u c o s e6p h o s p h a t ed e h y d r o g ?s e _ 1 ,G 州I C h r4 671 样品新鲜肝或肾匀浆,09p L 。 672 缓冲液T r is _ G l y c i n ep H89 参见附录A 的第A7 章。 6 73 电泳支持物醋酸纤维紊板 硬膜 。 674 电泳条件U 一2 0 0V ,f _ 4 5m i n ,移动方向由负极至正极。 675 染色方法琼脂覆盖法。 6 76 染色液参见附录B 的第B7 章。 6 77 标准对照 G p d l a C 5 7 B I 。/6 J慢带 G p d l h B A I .B /d 快带 G p d l cr w最慢带 678 判断方法参照上述对照动物读出带剐后与附录C 作比较。 67 9 G p d i 电泳结果及模式图.见图7 。 一.[ ..。..。. 二【】二【】[ 【】 BBABBAB P h e n m y p e B BABBAB b bbb∞bbbb∞bb G e n o q p eb b ?b b t , ba ab b 图7G p d f 电泳结果及模式圈谱 68 葡萄糖磷酸异构酶1 一u c o s e I h 0 8 p h a t ci s o m e r a s e1 ,O p i l C h r7 681 样品溶血素,03F L 。 8 6 82 缓冲液T ?·G l y e m ep H85 参见附录A 的第A6 帝。 683 电泳支持物醋酸纤维素硬膜。 68 4 电泳条件U 9 0 0V .f - 3 0m i n ,移动方向由正极至负极。 685 染色方法琼脂覆盖法。 686 染色液参见附录B 的第83 章。 687 标准对照 ,Ⅲj a B A I 。B /e J幔带 ;Ⅲ1 b C 5 2 8 1 ./6 J快带 688 判断方法参照上述对照动物凄出带型后与附录C 作比较 68 9 G p ·J 电泳结果及模式图.见图8 。 l 。,。一n m m m 二二- - 一a m 二二二 BBBBAA BbAAA P №口o l v Ⅳ B ¨ BBA A BT 3 A b bb bb hb h ∞¨ba a ?c n ?b bb bb b №n ¨∞∞ 图8G p l l 电泳结果殛模式图谱 69 血} I i 蛋白B 链 h e m o g l o b i n pc h a i n ,H b b C h r7 6 9 1 样晶溶血豪内加入1 /4 体积的烷化剂.参见附录B 的第B9 章,03p L 。 692 缓冲液1 - m G l y c i n ep H85 参见附录A 的第A6 章。 693 电泳支持物醋酸纤维素膜。 6 94 电泳条件U 一2 0 0V ., 3 0m i n ,移动斤向南负极至正乜l 。 695 染色方法蛋白染色法。 696 染色{ 瘦参见附录B 的第B6 章。 697 标准对照 H b bsC 57 B I ./叫 快带 H b bd B A L B /c J慢带 698 判断方法罄照h 述对』l { i 动物读出带型后与附录 1 作比较。 69 9 H b h 电淋结果及模式图,见图9 。 小加烷化剂处理的电泳结果及模式圈.见图1 0 。 眵 - ▲▲●盗墓。.j SSs DS DpD ID P h c n o H 口 SSsDS DPDDI ?川s d∞d d d d d d 0 e - I ‘n y p %?“s d ”“d d “ 图9H b b 电渌结果及模式图谱 ................I‘. sSsD S DPDDD P h e n e t y p e sSsDS DPIDf ?d d ⅫP Pd d d dd d㈣? ∞∞dd“ ∞a d dddd 图1 0H b b 电泳结果殛模式图谱 未烷化 61 0 异柠檬酸脱氢酶一I 和苹果酸酶一1 啪c l t r a t ed e h y d ?!甮 e n as e _ 1 ,m a l i ce n 2 y r i l e l I d hJ 和M o d l C h r l .9 61 01 样品肾匀浆03p L 。 61 02 缓冲液T r i sC i t r a t ep H76 参见附录A 的第A3 章。 61 03 电泳支持物醋酸纤维素硬膜。 61 04 电泳条件U - - 2 0 0V ,t - - 3 5m i n .移动方向由负极至正极。 61 05 染色方法琼脂覆盖法。 61 06 染色液参见附录B 的第B4 章。 61 07 标准对照 I d h l8 B A L B /c慢带 I d h lb C B A /N快带 M o d ]a B A L B /e快带 M o d lb C B A /N慢带 61 08 判断 法参照卜述对照动物读出带型后与附录C 作比较。 61 09 I 曲I 和M o d l 电泳纬果及模式图,见囝1 1 , 胁,{ ·- - ··_ ·_ ABBABAA P h e n o q p e AABBABAA “Mb bb b ∞b ba a ∞G c n o t y p e ∞a ab bbb∞bbn ∞ 围1 1 | d h l 和M 0 d f 电泳结果殛模式图 肽酶3 p e p t i d a s e _ 3 ,P e p 3 C h r 1 样品肾匀浆,06p I .。 缓冲液T r i sG l y c i n ep H85 参见附录A 的第A6 章。 电泳支持物醋酸纤维硬膜。 电泳条件U 一2 0 0V ,t 3 0 m i n ,移动方向由负极至正极。 染邑方法琼脂覆盖法。 ..................I‘, 61 16 染色液参见附录B 的第1 iI2 章。 61 17 标准对照 P e p 3 aC 5 7 B I 。/6 J悭带 P e p 3 b C B A /N №带 P e p 3 c F A l /T M 最快 61 18 削断方法参照上述对照动物读出带型后与附硅C 作比较 61 19 P e p 3 电泳结果及模式圈,见图12 。 ■k 蔫确 嘲 G B /T1 4 9 2 71 2 0 0 8 皿二 ] 工[ 口工 ●■■ ”- ---- BCABCBA P h 即啊∞ BCAeCBA b b? b bc c b h∞o e n o l v ∞ b b?¨cb b m 图1 2P e p 3 电泳结果殛模式图 61 2 磷酸葡萄糖转位酶l p h o s p h o g l c o m u l a s e1 .瞻m7 C h r5 61 2j 样品肾匀浆,06p L 。 61 22 缓冲赦T r i sG l y c i n c P H85 参见附录A 的第A6 章。 61 23 电泳支持物醋酸纤维索硬膜。 61 24 电泳条件U 9 0 0V .卢40m l n ,移动方向由负极争正槭。 61 25 染色南法琼脂覆盖法。 61 26 染色液参见附录B 的第B5 章。 61 27 标准对照 P g m l aC 5 7 B L /6 J快带 P g m ] bC B A /N慢带 61 28 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附采 1 作比较。 61 29P g n lJ 电泳结柴及模式罔,见网13 。 ___------_ * ,{ 一。- 。一。。- 。。 ABAB ARBABBP b c n o t y p 。AB ABABbABB ∞¨h hnb bb b ∞b bb bG e n o t y p e ∞b b ¨b ∞b bb b ∞№b b 图1 3P g m f 电泳结果殛模式图 .................‘‘. .................I‘. 61 3 转铁蛋白 t r a n s f e r r i n .T r f C h r9 61 31 样品血清t 03 ¨L 。 61 32 缓冲渡T r i s G l y e i n e p H85 参见附录A 的第A6 章。 6 1 33 电泳支持物醋酸纤维素膜。 61 34 电泳条件U 2 0 0V .t 一2 5m i n .移动方向由负极至正极。 61 35 染色方法蛋白染色法。 61 36 染色液参见附录B 的第B6 章。 61 37 标准对照 7 r f a C B A /N恢带 n fb C 5 7 B L /6 J慢带 61 38 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录C 作比较 61 39n ,电泳结果及模式图,见图1 4 。 Ⅳ_ ·- _ 。- - - - ] [ 【I 】] 口[ [ B BB B ABBB P h c n 嘶∞ BR M ㈧b6bⅡ∞∞b6 G e n o W p e ∞b b 7 夫鼠生化标记桓测细则 国1 4T r t 电泳结果殛模式图 71 碱性磷酸酶1 a l k a l i n ep h o s p h a t a s e1 .A k p l C h r9 711 样品肾匀浆t 03p L 。 712 缓冲液T r l sE D T A _ B o r a e M g C I ,P H76 参见附录A 的第A8 章 7l3 屯泳支持物醋酸纤维素硬膜。 714 电泳条件U 2 0 0V ,t 一4 0r a i n ,移动方向由负极至正极。 7 1 5 染色方法琼脂覆盖法。 716 染色液参见附录B 的第B1 0 章。 717 标准对照 A k p l a F 3 3 4 /N一条带 A k p 7bW K Y 缺失一条带 718 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D 作比较。 719A k p l 电泳结果及模式图,见图15 。 2 ”f - G B /T1 4 9 2 71 2 0 0 8 【II . AAABBBBAP h e n o t y p c AABBBB A ∞Ⅱ∞№b bb b ¨日 C , t n o t y p e∞nⅡbbM b b b b M 图1 5A k p l 电泳结果殛模式圈 7 2 血清碱性磷酸酶“p l a s m aa l k a l i n ep h o p h a t a 3 e 一1 - A l p l C h r9 721 样品血清,03 ”L 。 7 22 缓冲液;T r i sE D T A B o r a t ep H84 参见附录A 的第A5 章。 7 23 电泳支持物醋酸纤维硬膜。 724 电泳条件U 2 0 0V ,t 3 0 m i n t 移动方向由负极至正极。 725 染色方法琼脂覆盖法。 7 26 染色禳参见附录B 的第B 1 3 章。 727 标准对照 A l p ] a S H R 快带 A J “b B N 慢带 728 判断方法参j { l l 上述对照动物读出带型后与附录D 作比较。 7 2 9 A l p ] 电泳结果及模式图,见图1 6 。 o | ¨_ B BBBA ABB BBP №n 岍 BBBBAA8B日8 b bb b №b bu ∞b bb bb b №O c 7 】o l y * b bb bb bb b ∞¨№№b bb b 图1 6A 岫l 电泳结幂殛檀式田 73 过氧化氢酶一1 C a t a l a s e 一1 .C H C h r2 7 31 样品溶血索,o6p 1 J 。 732 缓冲液T r i s E D T A B o r a t e p H84 参见附录A 的第A5 章, 733 电泳支持物醋酸纤维素膜。 734 电泳条件U 2 0 0V ,t 3 0m i n .移动方向由负极至正极。 7 35 染色方法酶显色板祛。 73 .6 染色液参见附录B 的第B8 章。 737 标准对照 C sJa F 3 3 4 /N快带 c s jbW K Y 慢带 7 38 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D 作比较 7 39C s l 电泳结果及模式图,见图1 7 。 ●- ● BBABBAAB P h e ∞t y p e bBABBAAB h bb h Ⅲ?¨G e ?b bb ba Eb bbbaa∞bb 图1 7 凸7 电泳结果及模式围 酯酶l 和酯酶3 e s [ e r a s el ,e s t ?s c - 3 ,砾j 和E 娟 C h r 19 ,1 1 1 样品小肠组织匀浆,03p I ,。 2 缓冲液T r is _ E D T AB o r a t e p H84 参见附录A 的第A5 章。 3 电泳支持物醋酸纤维紊硬膜。 744 电泳条件u 2 0 0V .f 3 5m i n .移动方向由负极至正极 7 45 染色方法琼脂覆盖法。 7 46 染色液参见附录B 的第B1 章。 7 47 标准对照 E s 』a F 3 3 4 /N一条带 E “b A C ] 缺失带 F 3 3 4 /N S H R 快带 最慢带 慢带 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附泶D 作比较 E s l 和E s 3 电泳结果及模式罔,见图1 8 。 ABAA ??¨a a h A A三A童A DBD D B 十 一●■●■●■●■ n ,■??_ ● P h ∞o t y p 8 AAAABAA G 枷t y p ea a ∞∞∞∞∞b b ∞∞ 图1 8b 1 和E S 3 电泳结果及模式图 l■■ ■● ●■I ■ o 一●●●●●●●●●●I E E E 8 9 4 4 7 7 75 酯酶一4 es l e r 8 s P 4 t E s 4 C h r1 9 751 样品肾匀浆.03 t x L 。 7 .5 .2 缓冲涟T r i s E D T A B o r a l ep H84 参见附录A 的第A .5 章 753 电泳支持物醋酸纤维索硬膜。 754 电泳条件u 一2 0 0V .卢3 5m i n 。移动方向由负极至正极。 755 染色方法琼脂覆盖法, 756 染色液参见附录B 的第R 1 章。 757 标准对照 E a 4aS H R三条快带 E s 4bW K Y三条慢带 7 58 判断方法参照上述对照动物读出带型后与跗录D 作比较。 7 5 9 E s 4 电诛结果及模式图,见图1 9 。 G B /T1 4 9 2 71 2 0 0 8 ● “g - _ - i t - i -- BBAB BA ABB p h e n o t y p e BBAABB AABB №№∞nb bb b ∞∞”b bG c l l o m b bb b ∞∞b b №M ∞b bb b 图1 9E S 4 电泳结果及模式圉 76 酯酶- 6 ,8 ,9 e s t e r a 冲6 ,8 ,9 ,E s 6 .8 .9 C h r8 ,1 9 - 19 761 样品皋丸匀浆,06 t t L 。 7 62 缓冲液z T r i s - E D T A B o r a l ep H8 .4 参见附录A 的第A5 章 763 电泳支持物醋酸纤维索板 硬膜 。 764 电泳条件U 2 0 0V ,卢3 5r a i n .移动方向由负极至正投。 765 染色方法琼脂覆盖法。 766 染色灌参见附录B 的第B1 章。 767 标准对照 E s 6 E s 6 E s 8 E s 8 E s 9 F 3 4 4 /N B N B N F 3 4 4 /N 快带 慢带 快带 慢带 快带 aF 3 4 4 /N慢带 7 68 判断疗法参照上述对照动物读出带型后与附录D 作比较 769E s 6 ,8 .9 电泳结果及模式圈.见图2 0 。 ..........●t‘. r ■■] I 暑 L E 6 ?- _ - _ - - - ¨¨- - - ·_ &9 哮 -- _ [ I ] [ 【1 ] [ I I AAA ABABB &6P h c n o t y p eAA AAABABB ∞∞“ ∞∞M ∞b b №脚G c m q 口∞∞∞∞Ⅱb bnb b b b B BBBBABAA &8P h e m t y p cB BBBBABA A №№b b %b b ∞№∞∞自8C c n o “ “ c №№b bb bb b ∞b bn ∞ AAAAACACCB 9p b c m t y p cAAAAACAC C ∞∞∞∞∞c cnc cc c 脚。即0 l y p ∞M ∞∞∞c c ∞%“ 鲴2 0E s 6 ,8 .9 电泳结果爰模式图 77 酯酶1 0 e s t e r a s e1 0 ,E s l O C h r1 9 77 .1 样品肺匀浆,0 .6 “L 。 77 .2 缓冲液T r i s E D T A - B o r a t ep H84 参见附录A 的第A5 章。 电泳支持物醋酸纤维素硬膜。 电泳条件U - - 2 0 0V ,卢3 5m i n .移动方向由负极至正极 染色方法琼脂覆盖法。 染色液参见附录B 的第B1 章。 标准对照z E 5 l Oa F 3 4 4 /N三条慢带 E s l 0bB N三条快带 7 .78 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D 作比较 77 9E s l 0 电泳结果及模式图,见图2 1 。 - - - ●- AAABABBBB ~e 1 1 0 目m AA ABABBBB Ⅱa a ∞㈨№b bb bb bC c n o t y p e m∞口bb∞bbb b №b b 圈2 1E S f 0 电泳结果殛模式圉 7 .8 血红蛋白一口链 h e m o g l o b i n } c h a i n ,H b b C h r .1 7 81 样品溶血紊,06p L 溶血素6 m o I /L 尿素 I ,3 。 782 缓冲液T r i s - E D T A - B o r a t e p H84 参见附录A 的第A5 章。 7 83 电泳支持物醋酸纤维硬膜。 784 电泳条件U - - 2 0 0V ,户3 5 m i n ,移动方向由负极至正板。 7 .8 .5 染色方法蛋白染色法。 786 染色液参见附录B 的第B6 章。 16 ............I‘. - - _ ] - _ 口- _ ]- - J h ,●●●,、【 叫 一............● 7 87 标准对照 H b ba F 3 3 4 /N两条带 H b b b I ,E W /M缺失一条带 7 88 判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D 作比较 789 H b b 电泳结果及模式图t 见图2 2 。 l1 1 m 之 AAAABBAAAA p h e n 0 目∞ AAAABBAAAA nn ∞∞b b №∞口n ∞G e n o t y p e“ a a ∞∞№b , ba a nn∞ 团2 2H b b 电泳结果殛模式囱 8 近交系太、小鼠常规遗传监测判断标准 近交系动物具有纯合性,同基因性和个体性,因此送楦动物每个生化标记的袁型都应为纯合型f 每 个品系内个体间生化标记表型都应一致;经检测获得的生化遗传概貌应与原品系的生化遗传概貌相符。 依据近交系小鼠太鼠生化检测标记细则,完成检测并符合上速标准的近交系可揽为经常规遗传监 测未发现遗传变异的合格品系。 如果某些品系检测结果与上述标准不相符,应依据以下原则做出分析和处理 见表2 裹2 遗传检耐雏果的分析与处理原则 m 类≈{ 目符∞类女日能发生女 的原目 音女 ;f 十疵点m 期 ±遗传8 肇淘‰、重新引种 一十位m 期&±遗传g Ⅱ再次送检 发±遗传女壹B 经目定 再次送检时.动物应根据监测机构的要求选送。再次检测时如未发现带杂台型位点的动物,该品系 可被视为合格的近交系品系,但应注明突变基用的名称,必要时参照宴验动物遗传标准对品系的名称加 以修订。如再次检测时仍发现带有杂台型位点的动物.该品系应予以淘汰,重新引种。 G B /T14 9 2 7 .1 _ 一2 0 0 8 A .1A c e t a t e E D T A N a C 2 H 3 0 2 E D T A d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .2 p h o s p h a t eb u f f e r N a 2H P 4 ·1 2 H 2 0 K H 2 P 0 4 d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .3 、T r i sC i t r a t e T r i s d i s t i l l e dw a t e r 1 0 %C i t r a t ea c i d d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .4T r i sH C l T r i s d i s t i l l e dw a t e r H C l0 .1m o l /L d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .5T r i sE D T AB o r a t e T r i s E D T A b o r i ca c i d d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .6 T r i sG l y c i n e T r i s g l y c i n e d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .7 T r i s G l y c i n e T r i s g l y e i n e d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .8T r i sE D T AB o r a t eM g C l 2 T r i s N a 2 E D T A b o r i cA c i d M g C l 26 H 2 0 18 附录A 资料性附录 缓冲液配方 p H 5 .4 用时t 4 稀释 p H 7 .0 p H 7 .6 用时1 5 稀释 适量调至p H 7 .6 p H 8 .0 适量调至p H 8 .0 p H 8 .4 p H 8 .5 p H 8 .9 P H 7 .6 1 0 .6 0g 2 .4 8g 8 .6 3g 3 .7 7g 1 2 .1 0g 6 0 0n l L 2 4 .2 0g 8 0 0 m I . 1 0 .9 0g 0 .6 0g 3 .1 0g 10 0 0m I , 3 .0 0g 1 4 .4 0g 5 .16g 3 .4 8g 1 .8 1g 1 .8 6g 0 .3 3g 2 .0 3g d i s t i l l e dw a t e ru pt o A .9T r i sC i t r a t e c I t r a t ea c l d d i s t i l l e dw a t e ru pt o p H 8 .3 G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 1 6 .6 4g 4 .2 0g G B /T1 4 9 2 7 .1 2 0 0 8 B .1Bn a p h t h y la c e t a t e a c e t o n { a s tb l u eR Rs a l t 附录B 资料性附录 染色液配方 0 .0 5t o o l /I ,p h o s p h a t eb u f f e r p H 7 .0 过滤使用 2 %a g a r B .20 .0 5m o l /I .p h o s p h a t eb u f f e r p H 7 .0 u m b e l l i f e r y la c e t a t e a c e t o n 2 %a g a r 热 紫外监测仪下观察 B .30 .2m o l /I ,T r i s H C l p H 8 .0 0 .2 5m o l /LM g C 2 H 3 。2 2 1 0 %D - f r u c t o s e6p h o s p h a t ed i s o d i u ms a l t 1 %M
    编号:20190623225626150    类型:共享资源    大?。?span class="font-tahoma">1.44MB    格式:RAR    上传时间:2019-06-23
      
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    14927.1-2008 大鼠生化标记检测法 实验动物近交系小鼠 近交系小鼠大鼠 大鼠生化标记
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    GBT14927.1-2008实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法.rar,14927.1-2008,大鼠生化标记检测法,实验动物近交系小鼠,近交系小鼠大鼠,大鼠生化标记
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