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    I C S6 5 .0 2 0 .3 0 B4 4 缮雪 中华人民共和国国家标准 G B /T14 9 2 6 .5 8 2 0 0 8 代替G B /T1 4 9 2 6 .5 8 2 0 0 1 实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法 2 0 0 8 - 1 2 - 0 3 发布 L a b o r a t o r ya n i m a l l M e t h o df o re x a m i n a t i o no f I n f e c t i o u sc a n i n eh e p a t i t i sv i r u s 2 0 0 9 - 0 3 - 01 实施 宰瞀粥鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1 ” 刖再 G B /T1 4 9 2 6 .5 8 2 0 0 8 G B /T1 4 9 2 6 实验动物共5 4 个部分,为不同微生物和病毒检测技术方法。 本部分自实施之日起代替G B /T1 4 9 2 6 .5 8 2 0 0 l 实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法。 本部分与G B /T1 4 9 2 6 .5 8 2 0 0 1 相比主要技术差异如下 a 传染性犬肝炎是犬的主要烈性传染病之一,在我国犬群中广泛流行,是基础级犬和S P F 犬的 必检项目; b “6 结果判定”中增加了“6 .3 基础级犬群体免疫抗体合格率免疫抗体合格率一 被检动物 抗体阳性数/被检动物总数 l O O %?;〖度禾迕庖呖固搴细衤蚀笥诘扔? 0 %以上可判 为该犬群免疫合格”内容。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草。 本部分主要起草人田克恭、贺争鸣、范薇。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 一G B /T1 4 9 2 6 .5 82 0 0 1 。 1 范围 G B /T14 9 2 6 .5 8 2 0 0 8 实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法 G B /T1 4 9 2 6 的本部分规定了传染性犬肝炎病毒 I C H V 的检测方法、试剂等。 本部分适用于犬I C H V 的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过G B /T1 4 9 2 6 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单 不包括勘误的内容 或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分。 G B /T1 4 9 2 6 .5 0 实验动物酶联免疫吸附试验 G B /T1 4 9 2 6 .5 4 实验动物血凝抑制试验 3 原理 根据免疫学原理,采用I C H V 抗原检测犬血清中I C H V 抗体;或根据I C t t V 在一定的条件下,能凝 集人“O ”型红细胞,这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理,检测犬血清中I C H V 抗体。 4 主要试剂和器材 4 .1 试剂 4 .1 .1 E L I S A 抗原 4 .1 .1 .1 特异性抗原 用I C H V 感染M D C K 细胞,接种3d ~4d 后,当病变达 ~ 一阴性; 轻; 中; 重; 严重,下同 时收获。冻融三次或超声波处理后,低速离心去除细胞碎片,上清液再 经超速离心浓缩后制成E L I S A 抗原。 4 .1 .1 .2 正??乖?M D C K 细胞冻融破碎后,经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。 4 .1 .2 血凝素 I C H V 接种M D C K 细胞,培养3d ~4d ,当病变达 ~ 时收获培养物。冻融三次或 超声波处理后,低速离心去除细胞碎片,上清液分装后低温保存。 4 .1 .3 阳性血清 I C H V 实验感染或自然感染的犬血清。 4 .1 .4 阴性血清 无I C H V 感染、未经免疫的犬血清。 4 .1 .5 酶结合物 辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬I g O 抗体。 4 .1 .6 人“0 ”型红细胞。 4 .2 器材 4 .2 .1 酶标仪。 4 .2 .23 7 ℃培养箱或水浴箱。 】 G B /T1 4 9 2 6 .5 8 2 0 0 8 5 检测方法 5 .1 采用E L I S A 方法 见G B /T1 4 9 2 6 .5 0 进行血清学检测。 5 .2 采用H A l 方法 见G B /T1 4 9 2 6 .5 4 进行血清学检测。 6 结果判定 6 .1 基础级犬,接种疫苗后,经E L I S A 检测抗体效价大于等于1 1 6 0 ,或H A l 检测抗体效价大于等 于1 1 6 判为合格。 6 .2 S P F 级犬,不应进行疫苗接种,对阳性检测结果,选用同一种方法或另一种方法重试,如为阳性则 判为阳性。 6 .3 基础级犬群体免疫抗体合格率 免疫抗体合格率一 被检动物抗体阳性数/被检动物总数 1 0 0 % 基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于7 0 %以上可判为该犬群免疫合格。 7 结果报告 根据判定结果,作出报告。
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